by Cele: Karbapenemaza OXA-48 została zgłoszona z różnych krajów śródziemnomorskich. To głównie
kodowane na pojedynczym plazmidzie w różnych gatunkach Enterobacteriaceae. Scharakteryzowaliśmy epidemiologiczne i cechy molekularne Enterobacteriaceae (OPE) wytwarzających OXA-48 w Izraelu.
Metody: Badanie epidemiologiczne zostało przeprowadzone przez Krajowe Centrum Kontroli Zakażeń. Genotypowanie przeprowadzono przy użyciu typowania sekwencji multilocus. Plazmidy przenoszące blaOXA-48 badano przy użyciu S1 endonukleaza i polimorfizm długości fragmentów restrykcyjnych (RFLP). Skuteczność koniugacji OXA-48- niosące plazmidy badano w eksperymencie kojarzenia filtrów.
Wyniki: Od 2007 roku zidentyfikowano czterech pacjentów zakażonych OPE, wszyscy nie-Izraeli (dwóch Palestyńczyków, jeden Jordańczyk i jeden gruziński). Trzech było wcześniej hospitalizowanych; dwa w Jordanii i jeden w Gruzji. Gen blaOXA-48 był wykryto w trzech szczepach Escherichia coli należących do różnych kompleksów klonalnych, jednym Klebsiella oxytoca i jednym Sekwencja Klebsiella pneumoniae typ 101, jak wcześniej donoszono z Tunezji i Hiszpanii. We wszystkich izolatach Gen blaOXA-48 znajdował się wewnątrz Tn1999.2 i był przenoszony na plazmidzie 60 kb z identycznym RFLP wzór. Plazmid był w stanie skoniugować z Klebsiella spp. do E. coli i miał wydajność koniugacji do 10000 razy wyższy niż pKpQIL.
Wnioski: OPE, wprowadzane głównie przez turystykę medyczną, stanowią coraz większe zagrożenie dla pacjentów dotkniętych tą chorobą Kraje śródziemnomorskie. Plazmid przenoszący blaOXA-48 wykazał niezwykłą wydajność koniugacji, co prawdopodobnie ma znaczenie dla powodzenia jego rozpowszechniania.
Wstęp
OXA-48 jest jedną z niewielu β-laktamaz klasy Amblera, hydrolizujących karbapenem, które zostały zidentyfikowane u Enterobacteriaceae1 i są najczęściej zgłaszane. Po raz pierwszy zidentyfikowany w
Turcja w 2001 r.,2 Enterobacteriaceae produkujące OXA-48 (OPE) od tego czasu zostały zgłoszone z kilku krajów w środku Wschód, Afryka Północna i Europa.3,4 Gen blaOXA-48 został wykryte w różnych gatunkach i klonach Enterobacteriaceae, ale wspólną cechą prawie wszystkich izolatów jest lokalizacja gen wewnątrz transpozonu Tn1999 w plazmidzie 70 kb.1,4 Od 2006 r. odporność na karbapenemy u Enterobacteriaceae w Izraelu był spowodowany głównie przez pojedynczy klon KPC produkujący Klebsiella pneumoniae, uważany za sprowadzone z USA pod koniec 2005 r.5 Tutaj opisujemy epidemiologię i charakterystykę molekularną zakażenia OPE zidentyfikowanego w Izraelu od 2007 roku.
Metody
Pacjenci i izolaty
Pacjenci zostali zidentyfikowani po wykryciu obecności blaOXA-48 Enterobacteriaceae w ramach bieżącej działalności Narodowej Izraela Centrum Kontroli Zakażeń. Hodowle nadzoru odbytniczego zostały wykonane jako wcześniej opisane.7 Dane pacjentów zostały zebrane w ramach dochodzenia epidemiologicznego. Badanie zostało zatwierdzone przez Komisję Etyki Centrum Medycznego Tel-Avivu, Tel-Aviv, Izrael.
Charakterystyka fenotypowa i molekularna izolatów
Przeprowadzono identyfikację i badanie wrażliwości na środki przeciwdrobnoustrojowe przy użyciu systemu VITEK-2 (bioMe´rieux, Marcy l’E´toile, Francja). Wartości MIC ertapenemu, imipenemu i meropenemu zweryfikowano za pomocą Etest (AB Biodisk, Solna, Szwecja). Charakterystyka fenotypowa obejmowała test dwutarczowy beta-laktamazy o rozszerzonym spektrum (ESBL), zmodyfikowany test Hodge’a (MHT) oraz testy z kwasem boronowym, EDTA i kwasem dipikolinowym.8 Izolaty zbadano metodą PCR pod kątem geny mobilne.12 Typowanie sekwencji Multilocus (MLST) przeprowadzono dla izolatów Escherichia coli13 i K. pneumoniae.
Analiza plazmidowa
Plazmidowy DNA oczyszczony z pięciu izolatów transformowano do E. coli DH10B. Transformanty selekcjonowano na agarze LB z dodatkiem 100 mg/l ampicyliny i potwierdzono metodą PCR OXA-48. Oznaczenie wielkości plazmidu i polimorfizmu długości fragmentów restrykcyjnych (RFLP) wykonano zgodnie z wcześniejszym opisem.15 Grupę niezgodności plazmidu (Inc) określono przy użyciu metody typowania replikonów opartej na PCR16 i repP PCR1 Badano środowisko genetyczne genu blaOXA-48 za pomocą PCR i sekwencjonowanie jak opisano wcześniej.
